Als nächstes wollen wir uns mit der Frage beschäftigten, wie man aus einer humanen Gesamt-DNA Probe die Insulin-DNA, die ja nur einen kleinen Teil eines DNA Stranges (des Chromosoms) darstellt, isolieren und zudem mit den notwendigen Restriktionsschnittstellen versehen kann, um das gewünschte DNA-Fragment in den Plasmid ligieren zu können.
Die Lösung dieses komplex erscheinenden Problems nennt sich
PCR - Polymerase Chain Reaktion.
Prinzip der PCR:
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| Quelle: http://www.lci-koeln.de/static/generated/293-lci-focus.10.gif |
Aufgabe 1
Machen Sie sich mit Hilfe Ihres Lehrbuches und/oder mithilfe der folgenden Links mit der Funktionsweise und dem Prinzip der PCR Reaktion vertraut!
Das Verständnis der PCR Methode ist prüfungsrelevant !
- Chemgapedia - PCR (Seite 1-5)
Aufgabe 2
Welche chemischen Bestandteile muss man in ein Reaktionsgefäss geben, damit eine PCR ablaufen kann? Erläutern Sie stichwortartig, welche Aufgabe die jeweiligen Bestandteile während der Reaktion erfüllen.
Aufgabe 3
Im folgenden sehen sie ein typisches PCR-Programm.
Benennen sie die einzelnen Phasen und erläutern sie kurz, was bei jedem dieser Schritte auf molekularer Basis passiert:
Das Übungsblatt können Sie hier runterladen.
Aufgabe 4
In der folgenden Skizze ist die PCR des Insulin Inserts skizziert.
A) Erweitern Sie diese Skizze ! Welche Produkte sind nach dem ersten und zweiten PCR Zyklus in dem Ansatz enthalten? Verwenden Sie nach Möglichkeiten die gleichen Farben.
B) Wieviele Zyklen sind notwendig um mindestens ein vollständiges Insert für die Klonierung zu erhalten ?
Das Aufgabenblatt können Sie hier runterladen und von Hand erweitern.
Aufgabe 3
Im folgenden sehen sie ein typisches PCR-Programm.
Benennen sie die einzelnen Phasen und erläutern sie kurz, was bei jedem dieser Schritte auf molekularer Basis passiert:
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| PCR Programm |
Das Übungsblatt können Sie hier runterladen.
Aufgabe 4
In der folgenden Skizze ist die PCR des Insulin Inserts skizziert.
A) Erweitern Sie diese Skizze ! Welche Produkte sind nach dem ersten und zweiten PCR Zyklus in dem Ansatz enthalten? Verwenden Sie nach Möglichkeiten die gleichen Farben.
B) Wieviele Zyklen sind notwendig um mindestens ein vollständiges Insert für die Klonierung zu erhalten ?
Das Aufgabenblatt können Sie hier runterladen und von Hand erweitern.